PRACTICA 7

Preparación de un medio de cultivo

Objetivo: Aprender a preparar medios de cultivo Mac Conkey y EMB.

Material:

• 2 matraces
• 1 mechero
• 1 agitador de vidrio
• 1 tripie
• 1 tela de asbesto 
• 1 balanza granatoria
• 1 vidrio de reloj
• Cultivos Mac Conkey y EMB
• Olla Express

Procedimiento:

1. Se pesa en la balanza 1.5 gramos del medio de cultivo Mac Conkey para diluir en 30 ml de agua destilada.
2. Se mezcla las sustancias hasta que se homogeneicen bien.
3. Se pone a calentar la  sustancia sobre el Tripie en la tela de asbesto, hasta que llegue a su punto de ebullición y se deja un minuto.
4.  Se le coloca un tapón (un pedazo de algodón enredado en una gasa) y se mete a la olla express a 121° 15 lb 15’.
5.  Ya que se saca se vierte la sustancia en dos cajas petri y se espera a que cuaje.
6. Para el cultivo EMB se realiza el mismo procedimiento pero pesando 1.08 gramos para diluirlos en 30 ml de agua destilada.

Interpretación:

Medio de Cultivo EMB

Medio de Cultivo EMB

Medio de Cultivo EMB

Medio de Cultivo EMB

PRACTICA 6

Tinción de Wright

Objetivo: Solución colorante policromática para la tinción diferencial de la mayoría de las estructuras de la sangre así como algunos de sus parásitos, por el método de Wrigth.

Material:

• Colorante de Wright
• Beffer de fosfato
• 1 cuba
• 2 portaobjetos
• 1 microscopio

Para la venopunción cutánea.

• 1 lanceta
• torundas

Procedimiento:

1. Se realiza la punción cutánea, se da un masaje en el extremo lateral del dedo que se va a pinchar, se le hace la axepcia y se pincha.
2. Se coloca una gota de sangre a 3 mm de diametro del extremo del portaobjetos.
3. Colocar otro portaobjetos por delante de la gota, en un ángulo de 45° y dejar que la sangre se  extienda en el ángulo formado por los dos portaobjetos.
4. Empujar el segundo portaobjetos a una velocidad constante hacia el otro extremo.
5. Colocar el porta con la extensión hacia arriba en la cuba.
6. La extensión debe cubrirse con el colorante de Wright durante 3 o 4 minutos (el tiempo de coloración varia el lote empleado y el laboratorista deberá establecer el tiempo más adecuado para una mejor coloración).
7. Agregar suavemente Buffer de Fosfato en la misma cantidad que el colorante y mezclar soplando sobre la superficie evitando derrames. Dejar de 8 a 10 minutos hasta que aparezca una escarcha metálica.
8. Quitar el colorante con agua destilada en forma horizontal, luego tomando el porta en forma vertical, continuar el lavado hasta que haya desaparecido toda coloración azul.
9. Secar al aire en la posición vertical sobre papel absorbente.

Interpretación:

1

2

3

4

5

6

7

8

PRACTICA 5

Tinción de Gram

Objetivo: Equipo de colorantes para diagnostico clínico de microorganismos positivos y negativos a la tinción de Gram mediante el método de coloración diferencial en frotis.

Material:

• Violeta de Genciana
• Gram yodo
• Safranina
• Alcohol cetona
• 1 cuba
• 1 mechero
• 3 portaobjetos
• 1 pizeta con agua destilada

Para el exudado faringeo.

• 1 hisopo
• 1 abatelenguas

Procedimiento:

1. Se hace el exudado faringeo, con el abatelenguas se contrae la lengua, se mete el hisopo y se gira en las amigdalas.
2. Preparar y fijar un frotis de la muestra por analizar pasándola suavemente por un mechero.
3. Cubrir con colorante deVvioleta  de Genciana y esperar un minuto.
4. Escurrir el colorante de Violeta de Genciana sin enjuagar y cubrir con solución Gram Yodo. Esperar 1 minuto.
5. Lavar con solución de Alcohol Cetona hasta la decoloración.
6. Sacudir para evaporar el resto de Alcohol Cetona.
7. Lavar repetidas veces con agua destilada hasta que no haya restos de colorante.
8. Secar y observar al microscopio.

Interpretación:
   

Practica 4

Soluciones empíricas y valoradas

Objetivo: Que el alumno observe las diferencias entre las soluciones empíricas y valoradas.

Experimento 1: Soluciones empíricas

Material:

• Vaso de precipitado
• Termómetro
• Agitador de vidrio
• Soporte con anillo de hierro
• Rejilla de asbesto
• Pinzas para crisol
• Baño maría
• Probeta de 50 ml.
• Mechero 

Sustancias:

• Cloruro de sodio 
• Agua destilada
• Hielo

Procedimiento:

1. Mida 50 ml de agua destilada y coloquela en el vaso de precipitado, agregue unos cuantos gramos de sal y agite. Observe lo que ocurre.
2. Con este mismo sistema, vierta poco a poco suficiente cloruro hasta que no pueda disolverse mas, agite y registre la temperatura (t/1).
3. Agregue un exceso de sal y caliente hasta que la disolución se complete, agite si es necesario. Cuando todo el soluto se halla disuelto, mida la temperatura (t/2)
4. Deje enfriar el vaso con el contenido y observe lo que le ocurre en el fondo, coloque en un baño de hielo. 

Cuestionario:

1. ¿Qué tipo de solución preparo en el inciso a)? Diluida
2. ¿Qué tipo de solución preparo en el inciso b)? Saturada
3. ¿Qué tipo de solución preparo en el inciso c)? Sobre saturada
4. ¿Qué le ocurrió a la solución del inciso c)? ¿Cuanto se calentó? En el momento en que iba subiendo la temperatura, la sal se disolvía mas rápido.

Experimento 2: Soluciones valoradas.

Material:

• Vaso de precipitado
• Matraz aforado
• Pipeta graduada
• Pizeta
• Balanza granatoria
• Agitador

Sustancias:

• Ácido Clorhídrico
• Agua destilada
• Hidróxido de sodio  

Procedimiento:

1. En este experimento prepara 100 ml de una solución 0.1 M de ácido clorhídrico  por lo que debe calcular el volumen de ácido necesario, tomando en cuenta para realizar este calculo la pureza, tanto como la densidad.
2. Una vez que se ha calculado el volumen necesario para preparar la solución, mida este con una pipeta y páselo con cuidado a un matraz aforado, que contenga aproximadamente 20 ml de agua destilada hasta la marca del aforo.
3. Mueva varias veces hasta disolver el soluto y etiquete el matraz con la fórmula y concentración de la solución.
4. Ahora prepara una solución valorada en donde el soluto es sólido, serán 100 ml de una solución 0.1 N de hidróxido de sodio (trabaje de la manera mas rápida posible, porque es hridrocéptico).
5. Pese con precisión la masa que calculo y disuelvala en un vaso de precipitado, con un pequeño volumen de agua destilada, agréguela al matraz aforado, agite para disolver completamente el soluto, después añada agua suficiente con la pizeta hasta llegar al aforo. Continué moviendo varias veces y etiquete con el concentrado de la solución y la formula del soluto. 

Cuestionario:

1. ¿Cuales son las diferencias entre las soluciones empíricas y las valoradas? Las soluciones empíricas no tienen que tener un peso exacto y las valoradas si.
2. Exprese algunos usos de las soluciones valoradas. Para preparar postres y se lleva acabo en actividades de medicina.

Practica 3

¿Como podemos preparar soluciones valoradas?

Hipótesis: Conoceremos las partes de una solución e identificaremos las soluciones valoradas mas comunes así como su preparación.

Material y sustancias:

• Matraz aforado de 100 ml
• Cloruro de sodio
• 3 matraces Erlenmeyer
• Hidróxido de sodio 
• 1 balanza granataria
• Azúcar
• 1 bureta de 50 ml 
• Solución 0.1 N de NaOH
• 1 probeta de 50 ml 
• Indicador de Fenolftaleína
• 1 vaso de precipitado de 100 ml
• Agua destilada
• 3 vidrios de reloj
• 1 embudo chico
• 1 agitador de vidrio

Procedimiento:

1. En un vidrio de reloj pesar 1 gramo de cloruro de sodio y medir con la probeta 99 ml de agua de la llave. Agregar estas sustancias al vaso de precipitado y disolver la sal en el agua, empleando el agitador de vidrio para mover.  

          Resultado

% de NaCl = Masa de NaCl * 100 + Masa total = 5927.3 g.

     

   2. En un vidrio pesar 0.4 gramos de NaOH e introducirlos dentro de un matraz aforado de 100 ml.              Agregar agua destilada hasta el aforo y disolver completamente el hidróxido.

 

    3.  En tres matraces Erlenmeyer agregar a cada uno de ellos 10 ml de la solución preparada de hidróxido de sodio y 4 gotas de indicador de  Fenolftaleína.

    4.  En una bureta de 50 ml poner una solución 0.1 N de HCl.

    5. Con la bureta adicionar la solución del ácido a cada uno de los matraces del inciso a, hasta que el color desaparezca y la solución se ponga transparente.

    6. Obtener el promedio de los volúmenes de ácido, sumando los tres volúmenes y dividiéndolos entre 3.

    7.  En un vidrio de reloj pesar 3.4 gramos de azúcar de mesa y ponerlos en el matraz aforado de 100 ml y agregar agua de la llave hasta el aforo y disolver completamente la sacarosa.