PRUEBA DE COOMBS

PRUEBA DE COOMBS DIRECTA

Introducción:

El suero de Coombs permite establecer la presencia de globulina y por lo tanto de anticuerpos, ya que son de la misma naturaleza, los anticuerpos incompletos como son los que producen la eritroblastosis fetal y la anemia hemolítica adquirida, se absorben sobre la superficie del glóbulo rojo pero no los aglutinan, el suero Antiglobulina permite reconocer estos glóbulos sensibilizados al combinarse con los anticuerpos globulínicos que ya cubren.

Fundamento:

La prueba directa se realiza cuando el Anticuerpo se ha fijado sobre el eritrocito “in vivo”, permite establecer la sensibilización de los glóbulos rojos que tuvo lugar en el organismo. Se usa para el diagnóstico de eritroblastosis fetal, anemia hemolítica y reacciones hemolíticas postrasfusionales por sangre incompatible.

Material:

• Gradilla
• Tubos de ensaye
• Pipetas Pasteur con bulbo
• Centrifuga 
• Solución salina 
• Suero de coombs

Técnica:

1. Para identificar los glóbulos rojos sensibilizados es necesario remover la totalidad del suero de los eritrocitos, mediante lavadas repetidas con solución salina. 
2. Se prepara una suspensión de glóbulos rojos al 5% de la cuál se colocan dos gotas en un tubo de ensaye y se procede al lavado por tres ocasiones
3. Después del último lavado se resuspenden los glóbulos rojos nuevamente con una gota de solución salina, agregar dos gotas de suero de coombs y mezclar
4. Observar si existe aglutinación en el fondo del tubo con leves movimientos de inclinación.

Interpretación de resultados:

1. La aglutinación en el tubo testigo no debe existir.
2. Si el tubo problema presenta aglutinación, los glóbulos rojos están sensibilizados por algún anticuerpo incompleto.
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   

TP Y TPT

DETERMINACION DE TP & TPT 

INTRODUCCIÓN: 

Los factores intrínsecos de la coagulación se activan en presencia de tromboplastina cálcica en plasma citratado; se mide el tiempo transcurrido después de la adición del cloruro calcio (CaCl₂) hasta la formación de coagulo de fibrina.

El tiempo de protombina (TP) o Tiempo de quick ha servido para determinar trastornos de coagulación, TP es la determinación más frecuente junto con la APTT.

MATERIAL:

• Baño maria
• Tubos de ensaye
• Centrifuga
• Pipeta de 200 microlitros
• Plasma

PROCEDIMIENTO:

1.  Introducir la muestra en la centrifuga a 3500  R.P.M.  durante 5 min. para obtener el plasma sanguíneo.
2. Separar 100 microlitros de plasma con ayuda de la pipeta  y depositar  en un tubo de ensaye. 
3. Seguidamente agregar 200 ML de reactivo de TP y tomar el tiempo con un valor de referencia de 13 segundos.
4. Separar 100 microlitros de plasma con ayuda de la pipeta  y depositar  en un tubo de ensaye.
5. Colocar 100 microlitros de reactivo de TPT en el mismo tubo.
6. Meter el tubo de ensaye a incubar en el baño maría durante 3 minutos
7. Al sacarlo inmediatamente agregar 100 microlitros de cloruro de calcio y medir el tiempo en que se forma el coagulo de fibrina con un valor de referencia de 37 segundos.

FORMA INVERSA Y DIRECTA

PRUEBA DE LA DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO DE LA FORMA INVERSA

Introducción: 

El suero del paciente que contiene anticuerpos se pone en contacto con los eritrocitos que contienen antígenos formando un complejo Ag-Ac que se manifiesta microscópicamente mediante una aglutinación.

Material:

• 2 pipetas Pasteur
• 4 tubos de ensaye
• Gradilla 
• Centrifuga 
• Eritrocitos lavados A y B 
• Suero del paciente

Procedimiento:

1. Se preparan suspensiones de glóbulos rojos al 25 de la siguiente forma, en un tubo de ensaye marcado con la letra A se pone una gota de sangre A y en otro marcado con la letra B se pone una gota de sangre B, se llenan los tubos con solución salina se centrifuga a 3000 r.p.m. durante 3 min. y se decanta el liquido sobrenadante invirtiendo los tubos.
2. A cada uno de los tubos se añade 1 cm de solución salina.
3. Se marcan dos tubos de ensaye con la letra A y otro con la B, añadiendo dos gotas de suero.
4. Añadir a cada tubo una gota de suspensión de eritrocitos al 2 % al tubo A suspensión "A" y al tubo B suspensión "B".
5. Centrifugar a 1000 r.p.m. durante 2 min.
6. Sacar los tubos mezclando suavemente e interpretar el resultado.
   
   
   
   

   Interpretación de resultados:

• Si el suero problema aglutina a los glóbulos rojos A significa que tiene Ac B, el suero que tiene Ag A corresponde a la sangre B, el suero problema corresponde a un tipo de sangre del grupo B.
•  Si el suero problema aglutina a los glóbulos rojos B significa que tiene Ac B, el suero que tenga Ag B corresponde a la sangre A, el suero problema corresponde a un tipo de sangre del grupo A.
• Si el suero problema aglutina a  los glóbulos rojos A y B significa que tiene Ac A y B y este corresponde a la sangre O.
• Si el suero problema no aglutina en los globulos rojos A y B, significa que no tiene Ac A ni B, por lo tanto pertnece al grupo AB.

Detección de Antigeno de Superficie Hepatitis B en Suero Humano

BIO HBsAG

Introducción:

La hepatitis B es una de las mayores causas de hepatitis en la población mundial. Los portadores de la enfermedad pueden no tener el síndrome pero son fuentes de infección.

En la prueba de tira existen dos regiones a lo largo de la membrana, la zona en donde se obtiene el resultado, denominada región test T y la región de control C, donde se verifica que el desarrollo de la prueba haya sido satisfactorio.

Material y reactivos:

• Tira de Bio-HBsAg
• Suero

Procedimiento:

1. Se saca la tira del sobre.
2. Se introduce el extremo de la tira que tendrá contacto con el suero, teniendo precaución que no se sumerja mas allá de la linea delimitada por las flechas.
3. Resultados altamente positivos aparecerán a partir del segundo o tercer minuto. Muestras positivas con una menor concentración podrán tardar hasta 15 min. No interpretarse resultados transcurridos 30 min.

Interpretación de resultados:

Positivo: Aparecerán dos lineas rojizas (una en la zona de test T y otra en la zona de Control C)

Negativo: La presencia de una linea rojiza en la zona de control C.

Resultados de la prueba:

Negativo.