PRUEBA DE COOMBS

PRUEBA DE COOMBS DIRECTA

Introducción:

El suero de Coombs permite establecer la presencia de globulina y por lo tanto de anticuerpos, ya que son de la misma naturaleza, los anticuerpos incompletos como son los que producen la eritroblastosis fetal y la anemia hemolítica adquirida, se absorben sobre la superficie del glóbulo rojo pero no los aglutinan, el suero Antiglobulina permite reconocer estos glóbulos sensibilizados al combinarse con los anticuerpos globulínicos que ya cubren.

Fundamento:

La prueba directa se realiza cuando el Anticuerpo se ha fijado sobre el eritrocito “in vivo”, permite establecer la sensibilización de los glóbulos rojos que tuvo lugar en el organismo. Se usa para el diagnóstico de eritroblastosis fetal, anemia hemolítica y reacciones hemolíticas postrasfusionales por sangre incompatible.

Material:

• Gradilla
• Tubos de ensaye
• Pipetas Pasteur con bulbo
• Centrifuga 
• Solución salina 
• Suero de coombs

Técnica:

1. Para identificar los glóbulos rojos sensibilizados es necesario remover la totalidad del suero de los eritrocitos, mediante lavadas repetidas con solución salina. 
2. Se prepara una suspensión de glóbulos rojos al 5% de la cuál se colocan dos gotas en un tubo de ensaye y se procede al lavado por tres ocasiones
3. Después del último lavado se resuspenden los glóbulos rojos nuevamente con una gota de solución salina, agregar dos gotas de suero de coombs y mezclar
4. Observar si existe aglutinación en el fondo del tubo con leves movimientos de inclinación.

Interpretación de resultados:

1. La aglutinación en el tubo testigo no debe existir.
2. Si el tubo problema presenta aglutinación, los glóbulos rojos están sensibilizados por algún anticuerpo incompleto.
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   

TP Y TPT

DETERMINACION DE TP & TPT 

INTRODUCCIÓN: 

Los factores intrínsecos de la coagulación se activan en presencia de tromboplastina cálcica en plasma citratado; se mide el tiempo transcurrido después de la adición del cloruro calcio (CaCl₂) hasta la formación de coagulo de fibrina.

El tiempo de protombina (TP) o Tiempo de quick ha servido para determinar trastornos de coagulación, TP es la determinación más frecuente junto con la APTT.

MATERIAL:

• Baño maria
• Tubos de ensaye
• Centrifuga
• Pipeta de 200 microlitros
• Plasma

PROCEDIMIENTO:

1.  Introducir la muestra en la centrifuga a 3500  R.P.M.  durante 5 min. para obtener el plasma sanguíneo.
2. Separar 100 microlitros de plasma con ayuda de la pipeta  y depositar  en un tubo de ensaye. 
3. Seguidamente agregar 200 ML de reactivo de TP y tomar el tiempo con un valor de referencia de 13 segundos.
4. Separar 100 microlitros de plasma con ayuda de la pipeta  y depositar  en un tubo de ensaye.
5. Colocar 100 microlitros de reactivo de TPT en el mismo tubo.
6. Meter el tubo de ensaye a incubar en el baño maría durante 3 minutos
7. Al sacarlo inmediatamente agregar 100 microlitros de cloruro de calcio y medir el tiempo en que se forma el coagulo de fibrina con un valor de referencia de 37 segundos.

FORMA INVERSA Y DIRECTA

PRUEBA DE LA DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO DE LA FORMA INVERSA

Introducción: 

El suero del paciente que contiene anticuerpos se pone en contacto con los eritrocitos que contienen antígenos formando un complejo Ag-Ac que se manifiesta microscópicamente mediante una aglutinación.

Material:

• 2 pipetas Pasteur
• 4 tubos de ensaye
• Gradilla 
• Centrifuga 
• Eritrocitos lavados A y B 
• Suero del paciente

Procedimiento:

1. Se preparan suspensiones de glóbulos rojos al 25 de la siguiente forma, en un tubo de ensaye marcado con la letra A se pone una gota de sangre A y en otro marcado con la letra B se pone una gota de sangre B, se llenan los tubos con solución salina se centrifuga a 3000 r.p.m. durante 3 min. y se decanta el liquido sobrenadante invirtiendo los tubos.
2. A cada uno de los tubos se añade 1 cm de solución salina.
3. Se marcan dos tubos de ensaye con la letra A y otro con la B, añadiendo dos gotas de suero.
4. Añadir a cada tubo una gota de suspensión de eritrocitos al 2 % al tubo A suspensión "A" y al tubo B suspensión "B".
5. Centrifugar a 1000 r.p.m. durante 2 min.
6. Sacar los tubos mezclando suavemente e interpretar el resultado.
   
   
   
   

   Interpretación de resultados:

• Si el suero problema aglutina a los glóbulos rojos A significa que tiene Ac B, el suero que tiene Ag A corresponde a la sangre B, el suero problema corresponde a un tipo de sangre del grupo B.
•  Si el suero problema aglutina a los glóbulos rojos B significa que tiene Ac B, el suero que tenga Ag B corresponde a la sangre A, el suero problema corresponde a un tipo de sangre del grupo A.
• Si el suero problema aglutina a  los glóbulos rojos A y B significa que tiene Ac A y B y este corresponde a la sangre O.
• Si el suero problema no aglutina en los globulos rojos A y B, significa que no tiene Ac A ni B, por lo tanto pertnece al grupo AB.

Detección de Antigeno de Superficie Hepatitis B en Suero Humano

BIO HBsAG

Introducción:

La hepatitis B es una de las mayores causas de hepatitis en la población mundial. Los portadores de la enfermedad pueden no tener el síndrome pero son fuentes de infección.

En la prueba de tira existen dos regiones a lo largo de la membrana, la zona en donde se obtiene el resultado, denominada región test T y la región de control C, donde se verifica que el desarrollo de la prueba haya sido satisfactorio.

Material y reactivos:

• Tira de Bio-HBsAg
• Suero

Procedimiento:

1. Se saca la tira del sobre.
2. Se introduce el extremo de la tira que tendrá contacto con el suero, teniendo precaución que no se sumerja mas allá de la linea delimitada por las flechas.
3. Resultados altamente positivos aparecerán a partir del segundo o tercer minuto. Muestras positivas con una menor concentración podrán tardar hasta 15 min. No interpretarse resultados transcurridos 30 min.

Interpretación de resultados:

Positivo: Aparecerán dos lineas rojizas (una en la zona de test T y otra en la zona de Control C)

Negativo: La presencia de una linea rojiza en la zona de control C.

Resultados de la prueba:

Negativo.

 

VIH

DETECCIÓN DE ANTICUERPOS CONTRA VIH

OBJETIVO

Realizar  e interpretar correctamente el procedimiento para poder otorgar un excelente diagnósitco a nuestros pacientes.

MATERIAL:

•  Cartuchos de prueba.
•  Reactivo de lavado.
•  Pipetas desechables.
•  Inserto.

PROCEDIMIENTO:

1.- Utilizando una de las pipetas proporcionadas tome la muestra (suero/ plasma/ sangre total).

2.- Colocando la pipeta sobre el área de muestra adicione dos gotas de muestra (aproximadamente 60 uL) cuidadosamente.

3.- Adicione 2 gotas del reactivo de lavado al área de muestra.

4.- Permita que transcurran exactamente 10 minutos para que la reacción ocurra. El resultado se debe de leer exactamente al final de 10 minutos de tiempo de incubación. Los resultados son estables aproximadamente durante 5 a 10 minutos.

INTERPRETACIÓN:                                          

NEGATIVO	Una línea en el área de control.
POSITIVO	Una línea de cualquier intensidad en el área de prueba, una segunda línea en el área de control.
INVÁLIDO	Ausencia de una línea en el área de control.

 

RESULTADO:  Positivo.

CONCLUSIÓN:

Esta practica es muy sencilla y lleva poco tiempo realizarla, si una prueba da positiva es recomendable que se hagan mas estudios para confirmar que se tiene SIDA, pero es mejor protegerse se esta enfermedad que puede ser mortal.

Retracción del coagulo

INTRODUCCIÓN:

Puesto que el coágulo de fribrina encierra los elementos organizados (celulares) de la sangre (in vitro e in vivo) el volumen de los glóbulos rojos establece el límite inferior de la retracción de la fibrina. Por lo tanto, siendo normales los demás factores, el coágulo se retrae tanto más cuanto menor es el hematocrito. La retracción es directamente proporcional al número de plaquetas, e inversamente al hematocrito. Cuando las fibrinolinas son muy activas la fibrina puede disolverse casi tan rápidamente como se forma, y la retracción del coágulo se modifica en los transtornos de este tipo: choque, quemaduras etc.
Mide la cantidad de fibrina formada y su retracción; así como al número de función de las plaquetas, pues poseen una proteína similar a la actomiosina, que produce la retracción del coágulo.

MATERIAL:
* Tubos de ensaye para centrifugar
* Alambre de 1 mm. De grosor
* Baño maría de 37°c
* Equipo de venopunción


TÉCNICA:
1. Se pone en un tubo de centrifuga graduado de 5 ml de sangre venosa recién obtenida. Se lleva el alambre al fondo del tubo.
2. Se pone el tubo en el alambre, de un baño de agua a 37°c en donde se deja 1 hr. Después de la formación del coágulo sin tocarlo.
3. Se saca el alambre cuidadosamente y se deja escurir dentro del tubo el coágulo unido al alambre durante 1 a 2 min.
4. Se lee el volumen del líquido que quedo en el tubo. El resultado es expresar como un porcentaje del volumen inicial de 5 ml.
  
       



VALORES NORMALES:
Entre 48 y 64 por ciento.

RESULTADO:
Muestra 1: 50% y muestra 2: 46%

Prueba de Rumpel-Lee

Prueba de lazo o torniquete

Introducción:

Consiste en someter el antebrazo del paciente a una presión intermedia entre la sistólica y la diastólica durante 5 minutos. Tras la retirada del manguito inflable del tensiómetro, como para medir la T.A.  y esperar a que la piel recupere su estado relajado se observa la zona presionada. El conteo de petequias producidas por la rotura capilar en un área de unos 10 cm² superior a 30 da positivo en el signo de Rumpel-Leede.

Normalmente no debe de producirse mas de 5 petequias por debajo de la comprensión, más de 10 petequias y sobre todo extendidas mas alla del cuarto superior del antebrazo es patológico.   

Tiene como finalidad determinar la fragilidad de las paredes capilares, estimar la tendencia a la hemorragia y ayuda a reconocer la trombocitopenia.

Valores Normales:

0-10 = 1+

10-20 = 2+

20-50 = 3+

50 o más petequias = 4+

Los valores aumentados pueden indicar coagulación intravascular difusa. disminución del fibrinogeno, disminución de la protombina, deficiencia del factor VII, trombocitopenia, tromboastenia, deficiencia de vitamina K. Y puede estar asociado a afecciones no relacionados con trastornos de coagulación como: escarlatina, hipertensión, diabetes, gripe, sarampión, escorbuto.

Rosa de Bengala

ANTÍGENO BRUCELAR AMORTIGUADOR

INTRODUCCIÓN:

La brucelosis es una enfermedad causada por la bacteria Brucella, esta puede infectar al ganado vacuno, las cabras, los camellos, los perros y los cerdos. La bacteria se puede diseminar a los humanos si usted entra en contacto con carne infectada o la placenta de animales infectados o si bebe leche o come queso sin pasteurizar.

La prueba del Rosa Bengala o prueba del antígeno tamponado de Brucella, es una técnica rápida de aglutinación en porta para la detección de anticuerpos anti-Brucella en sueros animales y humanos.

La determinación se efectúa ensayando la suspensión tamponada

de  Brucella coloreada con Rosa Bengala frente a los sueros problema. La presencia o  ausencia de aglutinación visible es indicativa de la presencia o ausencia de anticuerpos en las muestras ensayadas.

MATERIAL Y REACTIVOS:

• Antígeno rosa de bengala
• Control positivo de brucella
• Control negativo de brucella
• Placa
• Pipetas

PROCEDIMIENTO:

       1. Colocar con la pipeta una gota de suero en el circulo de la placa.

      2. Mezclar el antígeno rosa de bengala hasta que este totalmente homogenizada, después colocar 0.03ml en la placa en el mismo aro donde esta la muestra, se mezcla con un aplicador. Repetir paso para los controles.

        3. Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos.

       4. Observar el resultado con la ayuda de una fuente de luz, leer directamente.

 

RESULTADOS:

Paciente: Yameli Noely Sotuyo Mata

La prueba salio negativa.

    CONCLUSIÓN:

Esta prueba tiene un importante valor en el campo epidemilogico al permitir agrupar los casos con alto riesgo de infección del resto de la población estudiada.

En el diagnostico clínico de los resultados de la prueba de rosa de bengala deben ser considerados siempre en relación a los hallazgos clínicos y otras pruebas de laboratorio.

 

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VDRL-USR

VDRL - USR

Introducción:

La Sífilis es una enfermedad generalizada, producida por Treponema pallidum.

Infecta el área genital, los labios, la boca o el ano y afecta tanto a los hombres como a las mujeres. Por lo general se adquiere por contacto sexual con una persona que la tiene. También puede pasar de la madre al bebé durante el embarazo. 

El diagnóstico se basa en la serología, con los métodos se determinan las 2 clases de anticuerpos:

• Cardiolipina: No treponema e inespecíficos.
• Antitreponemas: Específicos.

Debido a la facilidad  en su determinación en el tipo Cardiolopina se utilicen universalmente en las exploraciones iniciales, exámenes individuales o encuestas de población. La variante técnica más comúnmente empleada llamada VDRL (Venereal Disease Research laboratory) que determina la floculación en placa (cuantitativa) del antígeno con cardiolipina y lecitina.

Material:

• Antígeno en suspensión estabilizado (VDRL).
• Pipetas desechables.
• Placa cóncava.
• Agitador mecánico.
• Cronómetro.
• Microscopio.

Método cualitativo:

1.     En un anillo de la placa cóncava deposite 0.05 ml. del suero problema.

2.     En anillos diferentes colocar una gota de suero control positivo y en otra una gota de control 

negativo, extender sobre la superficie del anillo.

3.    Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizada previamente resuspendido.

4.    Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm. Durante 4 min. Las pruebas que se realicen en clima extremadamente seco puede provocar la evaporación de las muestras, por lo tanto, la placa en rotación se puede cubrir con la tapa de una caja de petri humedecida previamente con una gasa. (Este paso se realizó de manera manual)

5.    Leer inmediatamente al microscopio con objetivo y ocular 10x.

Resultados:

Los dos sueros salieron negativos, no hubo floculación.

Conclusiones:

 La identificación del Treponema pallidum es posible después de la realización de la práctica anterior, mediante la observación de la floculación en las placas correspondientes. 

Es una practica muy sencilla pero no es tan segura ya que el echo de que salga negativo no significa que no exista la enfermedad pero para asegurarse se hacen mas pruebas.

Determinación de aglutinogenos

GRUPO SANGUINEO

Objetivo:

El alumno determinara el grupo sanguíneo y el factor Rh de una muestra sanguínea utilizando los antisueros correspondientes y previa demostración correctamente.

Introducción:

Los grupos sanguíneos se han clasificado así por poseer características diferentes, estas características son los antígenos (aglutinogenos) y los anticuerpos (aglutininas) que son los responsables de las reacciones adversas inmunológicas en las transfusiones.

Material: 

• Equipo de venopunción.
• Placa de vidrio excavada. 
• Aplicadores de madera.
• Lanceta estéril.
• 4 Tubos de ensaye (por muestra de sangre).
• Gradilla.
• Centrifuga.

Reactivos:

• Anti-suero A
• Anti-suero B
• Anti-suero D
• Solución isotónica de NaCl al 0.9%

Método en placa excavada:

1. Se utiliza punción cutánea con la lanceta, se deshecha la primera gota y se deposita una gota en cada una de las excavaciones en forma horizontal o se marcan las letras A, B y Rh, y posteriormente se añade una gota de suero en donde le corresponda.
2. Mezclar perfectamente con un aplicador diferente cada una de las preparaciones.
3. Leer el resultado.

Método en tubo de ensaye:

1. Se utiliza la punción venosa, se deposita 2 ml de sangre en un tubo de ensaye con 9.8 ml de solución isotónica de NaCl al 0.9%, para formar una suspensión de eritrocitos al 2%.
2.  Marcar 3 tubos de ensaye con las letras A,B y Rh y depositar el suero que le corresponde.
3. Añadir a los tubos una suspensión de eritrocitos al 2%.
4. Centrifugar a 1000 r.p.m. durante 1 minuto.
5. Sacar los tubos e inmediatamente ver si existe aglutinación.

Interpretación de los resultados:

Resultados:

Método en Placa excavada. "A" Rh Positivo.

Método en Tubo. "A" Rh Positivo.

Conclusión:

Esta practica debe llevarse a cabo con responsabilidad ya que si al dar los resultados del grupo sanguíneo de una persona, no son los correctos y se realizara una transfusión de sangre podría morir por no insertarle la sangre que le corresponde, de ahi en fuera es una practica muy sencilla.