HEMOGLOBINA

DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA

Objetivo: Determinar cuántos gr. de hemoglobina (Hb) hay en toda la sangre circulante, para tener un diagnostico clínico ya que pueden variar diversas enfermedades debido a un valor anormal de hemoglobina.

Fundamento: Los principales componentes de la Hemoglobina son: El grupo Hem y la Globina. La médula ósea roja y el Hígado son los principales productores del Hem.

La Hemoglobina se puede cuantificar en el laboratorio por métodos colorimétricos, como el de la “Cianometahemoglobina” utilizando el reactivo de Drabkin, el cual contiene bicarbonato de potasio a una concentración tal que los eritrocitos al contacto con esta solución explotan, dejando libre la Hemoglobina.

La sangre se diluye en líquido de Drabkin, el cual hemoliza los hematíes y convierte la hemoglobina en cianometahemoglobina (cianuro de hemoglobina). La solución que se produce se lee por medio de un espectrofotómetro o fotocolorímetro. Su grado de absorbancia es proporcional a la cantidad de hemoglobina que contenga la sangre.

Materiales y reactivos:  

·         Un colorímetro fotoeléctrico o un espectrofotómetro.

·         Una pipeta para sangre (pipeta de Sahli) graduada hasta 0,02 mL, con tubo de goma y boquilla.

·         Una pipeta de vidrio graduada de 5 mL

·         Tubos de ensayo.

·         Reactivo de Drabkin para dilución.

Técnica:

1.- En un tubo de 13 x 100 colocar exactamente 5 mL de reactivo de Drabkin, marcarlo como problema (P). Obtener 5 ml de sangre venosa con anticoagulante (EDTA). 

2.- Mezclar perfectamente la sangre problema, por inversión por lo menos 20 veces antes de tomar la muestra. Con una pipeta automática o pipeta de Shali se toma exactamente 0,02 mL (20 µL) de sangre total, limpiar luego la punta de la pipeta y se vierte en el tubo que contenga reactivo de Drabkin. Se enjuaga 3 veces y se mezcla.

3.- Mezcle la solución de Drabkin con la sangre por inversión y con mucha precaución (utiliza parafilm para tapar los tubos, recuerda que el reactivo tiene cianuro, el cual es un VENENO)

4.-Dejar en reposo por espacio de 3 a 5 minutos. Para que se  efectúe la reacción. Después de ese tiempo se observara una coloración roja transparente, se procede a realizar la lectura.

5.-Leer en absorbancia con filtro verde a 540 nm llevando a cero el fotómetro con agua destilada / Drabkin.

MEDICIÓN EN EL ESPECTROFOTÓMETRO.

Medición de Transmitancia: 

1.- Encender el Espectrofotómetro 30 minutos antes, después  seleccione la longitud de onda deseada (540 nm para Hb) con las teclas numéricas y oprima <GO TO>.  Aparecerá en la pantalla el valor numérico.

2.-Presine < %T> para Transmitancia.

     Aparecerá en la pantalla “T”.

3.-Insertemla cubeta con el blanco en el portacubeta, cierre la puerta y oprima <SECOND FUNCTION> Y <100 %>. Aparecerá En la pantalla 100.0 T.

4.-Remueva el blanco e inserte la muestra problema contenida en la celda y cierre la puerta.

 Aparecerá en la pantalla el valor en Transmitancia.

5.-Retire la cubeta del compartimiento y cierre la puerta (lave la cubeta y  guárdela)

6.-Si no va usar más el aparato, apáguelo y cúbralo, si desea continuar trabajando, elija el modo de trabajo siguiente y continúe.

Resultado:

Para sacar el total de Hb se hace lo siguiente Hb total = concentración de Hb (gr/ml) x volumen sanguíneo (ml).
en espectrofotómetro se aplica la siguiente fórmula:
muestra/ estandar x 15 = Hb.

Cálculos: .353/.340x15 = 15.574 gr/dl.

Observación:

Al saber el total de Hg era 15.574   identificamos que la sangre era de una mujer y que está dentro del rango normal de Hb.

Valores de referencia:

Mujeres……………………………………... 12 - 16 g/dl

Hombres……………………………………. 14 - 17 g/dl

Conclusión:

Esta práctica es rápida y fácil para llevar a cabo la determinación de hemoglobina, aunque es un poco cara por el reactivo que lleva, pero es certero el resultado si lo haces bien.

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